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详细介绍
脂蛋白在人体中主要起到运输脂质(如胆-固醇、脂质、甘油三酯)的作用,按照分子量大小,主要分为以下几种(从高到低):乳糜(CM)、极低密度脂蛋白 (VLDL)、中间密度脂蛋白 (IDL)、低密度脂蛋白 (LDL)、高密度脂蛋白(HDL)等。其中HDL是密度最高的脂蛋白,不像其他大分子脂蛋白,主要将脂质运输到细胞,HDL是将脂质运出细胞,因此,高密度脂蛋白具有清除血管内多余血脂、清除血垢、清洁血管、维持细胞内胆-固醇量的相对衡定的作用,从而限制动脉粥样硬化的发生发展,起到抗动脉粥样硬化作用。本品Human DiI-High Density Lipoprotein为荧光探针DiI标记的高密度脂蛋白,可以用来观察培养细胞的HDL结合位点,或筛选HDL受体表达缺陷型细胞突变株。也可以通过流式细胞术评估细胞受体水平,或检测组织内的受体水平。
保存:4℃避光保存,不可以冷冻,保质期6周。
操作流程:
1.无菌条件下,将DiI-HDL用细胞培养基稀释至10-30 µg/mL。
2.加入活细胞内,37℃培养4-5小时。
3.孵育结束,吸去含有Human DiI-HDL的培养基,并用无探针的培养基洗几次。
4.根据实验需求用荧光显微镜或流式细胞仪检测。
4.1荧光显微镜观察
采用标准的罗丹明激发:发射滤光片(或建议使用波长为:Ex/Em=549 nm/565 nm);若需要请使用含3%甲醛的PBS进行固定,切勿使用甲醇或丙酮固定,因DiI易溶于有机溶剂。注: 需设阳性细胞以做对照。
4.2细胞分选(流式细胞术)
胰-蛋白酶处理细胞或者加入EDTA制成单细胞悬液,选用合适的已标记纯化细胞用作阴性和阳性对照,从而进行流式分选设门。(建议使用波长为Ex: 514/549 nm; Em: 565 nm)。
注意事项:
1,本品配制成溶液后不稳定,需要即配即用。
2,为了您的健康,请佩戴一次性手套。
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