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D-荧光素钾盐
简要描述:

D-荧光素钾盐是荧光素酶 (Luc) 的天然底物,对萤火虫产生典型的黄绿光进行催化。该反应产生的 560 nm 化学发光在几秒钟内达到峰值,当底物荧光素过量时,光输出与荧光素酶浓度成正比。荧光素酶 (luc) 基因是研究和活性分子筛选的常用报告基因。

  • 产品型号:PC11514-100mg
  • 参考价格:380
  • 更新时间:2024-11-19
  • 访  问  量:311

详细介绍

D-荧光素钾盐基本特性:

1CAS NO:115144-35-9

2化学名:4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylic acid potassium salt,D-Luciferin firefly, potassium salt

3分子式:C11H7N2O3S2K

4分子量:318.42 g/mol

5纯度:>99% (HPLC),分子生物学级(超纯)

6外观:浅黄色至黄色粉末7)溶解性:溶于水(60 mg/ml)

使用方法:

A.体外生物发光检测

1储存液制备用蒸馏水溶解D-荧光素钾盐,配制成15mg/ml的储存液(100×),混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存,避免反复冻融。建议使用的工作液浓度为150µg/ml(相当于468µM)。

2荧光素酶反应缓冲液制备配方【1×,参考Yuichi Oba, et al., 2003】:100mM Tris-HCl(pH 7.8),5mM MgCl2,250µM CoA,150µM ATP。具体缓冲液组成可参考其他文献资料来调整。按照以上配方制备荧光素酶反应缓冲液(2×)。

3收集细胞裂解上清(荧光素酶表达)根据需要检测的细胞类型,选择合适的裂解液进行细胞裂解,离心收集上清后续检测待用。

4萤火虫荧光信号检测

【注①】:萤火虫荧光信号的检测方法大体上取决于冷光测定仪(luminometer)类型(是手动型荧光计、单管注射型或者酶标板读数型荧光计)。根据特定发光测定仪,来考虑注射用量和程序设置。

【注②】:需设置不含荧光素酶的孔(用作阴性对照),以测定背景荧光。

例:注射式冷光测定仪(injectible luminometer,单样或微孔板,200µl终体积)

a吸取100µl荧光素酶反应缓冲液(2×)到一干净的冷光测定仪比色皿或96孔板的各孔(最好使用全白平底的96孔板);

b吸取50~98µl裂解上清到皿或孔内;

c如果有需要,用水来补足使得总体积到198µl;

d设置程序注射2µl荧光素储存液(使工作浓度150µg/ml),程序:2~5秒延迟(delay),之后10s测定。

B.活体成像分析

1用无菌的PBS(w/o Mg2+)或者DPBS(w/o Mg2+)配制D-荧光素(钾盐)工作液(15mg/ml),0.2µm滤膜过滤除菌。混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存,避免反复冻融。一旦使用,放到4℃解冻,保持冰冷且避光。

2注射量取决于注射方式,具体如下:注射方式剂量静脉注射(25-27 gauge针头)    按10µl/g体重浓度,加入相应体积的15mg/ml荧光素工作液    腹腔注射(25-27 gauge针头)按10µl/g体重浓度,加入相应体积的15mg/ml荧光素工作液肌肉注射(27 gauge针头)50µl,浓度为1-2mg/ml荧光素工作液鼻内注射(pipette)50µl,浓度为3mg/ml荧光素工作液

3注射入体内10-20 min(待光信号达到较好的稳定平台期),再进行成像分析。注:建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线,从而确定最高信号检测时间和信号平台期。

 

 

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