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荧光标记氧化型低密度脂蛋白制备工作如何进行?

更新时间:2024-08-19      点击次数:178
  荧光标记氧化型低密度脂蛋白是血浆中的主要胆固醇运输颗粒,其在某些条件下被氧化修饰后形成的Ox-LDL在动脉粥样硬化等心血管疾病的发生发展中起着重要作用。为了研究LDL在病理和生理过程中的作用,科学家们开发了多种标记方法,以便在细胞和分子层面进行追踪。
  首先,LDL的提取是制备的第一步。从人血浆中分离出来的LDL通过一系列的离心和沉淀步骤得到纯化。得到的LDL需要在含10μMCuSO4的PBS溶液中进行氧化反应。铜离子作为氧化催化剂,推动脂质过氧化反应的进行。此过程中,LDL中的多不饱和脂肪酸(PUFAs)被氧化,形成一系列复杂的氧化产物,包括丙二醛(MDA)和4-羟烯酸(4-HNE)。这些物质进一步与ApoB-100结合,形成希夫氏碱,从而改变LDL的结构和功能特性。
  接下来是进行荧光标记。常用的荧光标记物为DiI,这种标记物可以与LDL颗粒结合,不影响其生化特性。将DiI与已氧化的LDL孵育,通过疏水作用使DiI嵌入LDL颗粒的脂质核心中。经过适当的孵育时间后,未结合的DiI通过透析或凝胶过滤去除,最终获得荧光标记的氧化型低密度脂蛋白,即DiI-Ox-LDL。
  最后是荧光标记氧化型低密度脂蛋白的注意事项与应用领域。在整个过程中,需要严格控制实验条件,如温度、pH值和反应时间,以确保荧光探针的有效结合并且保持Ox-LDL的生物活性。制备后的DiI-Ox-LDL通常在4℃避光保存,且不可冻结。该标记脂蛋白广泛用于研究脂质代谢、受体介导的内吞作用以及动脉粥样硬化机制。

荧光标记氧化型低密度脂蛋白

 

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